刘汉伟章跃龙刘佳乐琪君赵少浩张晓玲马中春

摘要目的：以丰年虾无节幼体 （Artemia salinaL.）为模式生物对12种油墨的急性毒性进行了评价。方法：用96孔板浸渍法将在人工海水中孵化的丰年虾暴露在油墨溶液中，设置重铬酸钾作为阳性参照物，24h后显微镜下观察并记录丰年虾死亡数，SPSS18.0软件分析计算受试物的LC50值及95%的置信区间。结果:12种不同颜色的油墨LC50值介于6.48~36.11g/L，重铬酸钾LC50值为18.63 mg/L。油墨毒性顺序由大到小依次为红色＞浅粉色＞粉红色＞紫色＞绿色＞棕色＞蓝色＞黄色＞黑色＞天蓝色＞黄绿色＞橙色。结论：12种油墨对丰年虾无节幼体的效应低于参照物重铬酸钾，表现出较低的毒性效应。

关键词 丰年虾；油墨；急性毒性

Studies on the Acute Toxicity of Printing Ink toArtemia salina

LIU Han-WeiZHANG Yue-LongLIU JiaLE Qi-Jun

ZHAO Shao-HaoZHANG Xiao-Ling  MA Zhong-Chun

AbstractObjective：To study the acute toxicity of twelve kinds of printing ink toArtemia salinalarvae. Methods：TheArtemia larvaehatched in artificial seawater were exposed to different concentrations of ink solutions for 24h in 96-well paltes, and the lethal effects were recorded under a microscope. Potassium dichromate was used as a positive control. The 24h median lethal concentrations (24h-LC50) and 95% confidence intervals were determined by Probit analysis with SPSS18.0 software. Result：The tested twelve kinds of printing ink showed different toxic effects toArtemia salinawith 24h-LC50ranging from 6.48~ 36.11g/L. The 24h-LC50of potassium dichromate was 18.63mg/L. The order of toxicity of the twelve ink was red＞light pink＞pink＞violet＞green＞brown＞blue＞yellow＞black＞azure＞kelly＞orange. Conclusion：The twelve tested ink showed lower toxicity toArtemia salinacompared with potassium dichromate.

Keywords Artemia salina; printing ink; acute toxicity

丰年虾又称卤虫、丰年虫，属节肢动物门、甲壳纲、无甲目、盐水丰年虫科、卤虫属[1]。丰年虾广泛分布于内陆盐湖和海岸盐田中，除两极外，世界各地均有分布[2]。丰年虾卵易获得，孵化操作方便，对环境变化反应灵敏, 现已被广泛用于水环境、化学品、农药和天然药物的急性毒性评价[3-5]，在国外已实现标准化，而我国也将其用作海洋石油勘探开发污染物生物毒性评价的模型生物。随着社会发展，油墨品种和产量与日俱增，但油墨带来的毒性问题严重影响了人类赖以生存的环境，油墨对环境的污染成为当前人们关注的焦点[6]。目前，尚无关于油墨对丰年虾的急性毒性报道。本研究以实验室孵化的丰年虾为模型生物，研究了12种油墨对丰年虾的急性毒性，旨在为减少和控制油墨的环境危害提供数据参考。

1  材料与方法

1.1 实验材料

美国大盐湖红心A丰年虾卵，海盐（Live House/生命之源），重铬酸钾（常州安建化工有限公司），96孔板（西格玛奥德里奇)，光学显微镜（奥林巴斯CX31RTSF），生化培养箱（Memmert IPP 260 plus）。

1.2 丰年虾孵化

称取实验所需质量的人工海盐转入烧杯中，加入适量空气饱和的蒸馏水溶解，配成浓度为2.5%的人工海水，用0.5mol/L的氢氧化钠溶液或0.5mol/L盐酸溶液将pH值调节至8.0~8.5。取适量虾卵放入人工海水中，覆盖不超过三分之二的液面即可，最后转入25±1℃的生化培养箱中孵化24h。

1.3 试验溶液制备

准确称取所需质量的受试物，加入适量的人工海水配成所需浓度的试验溶液。

1.4 染毒及观察

首先，用移液枪移取所需体积的试验溶液至96孔板中，再加入适量人工海水，使每个实验孔中液体体积达到190μL，然后在光照条件下使丰年虾聚集，用移液枪移取10μL含有10~15只丰年虾的溶液转入装有受试物溶液的96孔板中，混匀。实验同时设置空白对照和重铬酸钾阳性对照，每个浓度组设置三个平行。96孔板在25±1℃的恒温培养箱中培养，光暗周期为8h：16h，实验过程不喂食。染毒后24h用显微镜观察并记录丰年虾死亡数。

1.5 统计分析

用Abbott公式计算校正死亡率[7]，然后通过SPSS18.0分析软件Probit程序分析，计算受试物的LC50值及95%的置信区间[8]。

2  结果

2.1 重铬酸钾的丰年虾毒性

如表1所示，重铬酸钾的24h-LC50值为18.63mg/L，95%置信区间为14.16mg/L ~23.79mg/L，结果与文献值（16.87mg/L）接近[9]。

2.2 12种油墨的丰年虾毒性

丰年虾在12种油墨溶液中暴露24h后，急性毒性结果如表1所示。其中，红色、浅粉色和粉红色油墨对丰年虾的毒性较强，分别为6.48g/L、7.45g/L和7.17g/L；其次为紫色，LC50值为13.55g/L；棕色和绿色油墨的毒性较紫色次之，分别为26.54g/L和26.35g/L；毒性较低的几种油墨分别是蓝色、黄色、黑色、天蓝色、黄绿色和橙色，LC50值依次为29.38g/L、31.14g/L、34.21g/L、34.90g/L、35.28g/L和36.11g/L。12种油墨对丰年虾的毒性顺序依次为红色＞浅粉色＞粉红色＞紫色＞绿色＞棕色＞蓝色＞黄色＞黑色＞天蓝色＞黄绿色＞橙色。

3  讨论

3.1 油墨组分

根据表2可以看出，12种油墨主要由水50%、甘油30%、糊精10%、丙二醇5%和食用颜料5%这5种物质组成，前4种成分和比例均相同，只有第五种食用颜料的颜色有所差别。

3.2 油墨毒性

研究结果表明，12种油墨的LC50值范围为6~40g/L之间，与阳性对照重铬酸钾LC50值（18.63mg/L）相比，毒性要低3个数量级，表现出较低的毒性效应。但油墨间又表现出不同的毒性，接近红颜色的3种油墨毒性最强，依次为红色、浅粉色和粉红色，LC50值接近于7g/L，而黑色、天蓝色、黄绿色和橙色4种颜色毒性相近，相对较低，LC50值在35g/L左右。在各组分和比例一致的情况下，颜色差别造成了油墨 对丰年虾的毒性效应差异。

丰年虾适宜的生存环境pH值为8.0~8.5的海水中，如果受试物能够引起溶液pH值的明显改变，该方法的适用性应作进一步优化和调整。本研究未研究光照波长对丰年虫的毒性敏感性影响，因此尚不能判定是颜料本身还是因颜料颜色造成光照波长的改变导致了丰年虾的毒性差异，还有待于进一步研究。本研究仅评价了由水、甘油、糊精、丙二醇和食用颜料这5种物质组成的油墨毒性，因此并不能由此推断其他类型油墨对丰年虾的毒性效应。

表1 油墨毒性测定结果

表2 油墨的组分信息

参考文献

[1]刘永，汪小月，邱立红，等.7种拟除虫菊酯农药对卤虫的急性毒性研究[J].生态毒理学报,2011,06(5):557-560.

[2]高天然.重金属镉对不同卤虫种群毒性效应研究[D].南京信息工程大学,2017.

[3]司华阳,陈乃富,陈乃东.霍山产铜皮石斛多糖含量测定及其卤虫毒活性研究[J]. 生物学杂志,2017,34(3):64-68.

[4] Liu HW,Hu L,Zhang AL,et al.Steroids and phenolic constituents from the fruiting bodies of the basidiomycete Sarcodon joedes[J]. Nat Prod Res,2013,27(1):80-84.

[5]吕向立,吴鹏,朱艾嘉,等.城市污水厂污泥倾倒对海洋生物的毒性研究[J].生态毒理学报,2017,12(3):636-643.

[6]李彦宝,程继夏,史伟男,等.油墨与环境保护[J].西安文理学院学报:自然科学版,2007,10(2):111-114.

[7]Abbott,WS.A method for computing the effectiveness of an insecticide.Jour.Econ. Entomol.,1925,18(2):265-267.

[8]贾春生.利用SPSS软件计算杀虫剂的LC50[J].应用昆虫学报,2006,43(3):414-417.

[9]卢珩俊,陆胤,徐冬梅,等.咪唑类离子液体系列对卤虫的急性毒性研究[J].中国环境科学,2011,31(3):454-460.