邵宝林 于刚 宿白玉 刘露希 杨益芬 鲁昕 胡江涛

为摸清猕猴桃中有毒有害物质的残留动态，确保出口产品质量安全符合主要贸易国官方要求，本文采用气相色谱-质谱法，测定施药后不同时期苯醚甲环唑在猕猴桃果实中的残留量，并依据残留消解动态，按照欧盟和日本食品安全卫生标准，对10%苯醚甲环唑水分散粒剂的使用安全性进行评价。结果表明，苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留量随着时间的推移逐渐下降，动态曲线符合一级动力学方程Ct=0.5359e-0.184t，半衰期为3.767 d，属易消解农药；按照欧盟和日本猕猴桃农药最大残留限量要求，10%苯醚甲环唑水分散粒剂按照推荐剂量单次施药，10天后采摘食用是安全的。

关键词 猕猴桃；苯醚甲环唑；残留动态；安全性评价

Residual Dynamics and Safety Evaluation of Difenoconazole in Kiwifrit

SHAO Bao-Lin1,2YU Gang1,2SU Bai-Yu1LIU Lu-Xi1YANG Yi-Fen1LU Xin1HU Jiang-Tao1,2

Abstract In order to find out the residual dynamics of toxic and harmful substances in kiwifruit and to ensure that the product quality and safety meets the official requirements of major trading countries, the residues of difenoconazole in kiwifruit were determined by GC-MS at different stages after application of 10% difenoconazole WG, and the safety of 10% difenoconazole WG was evaluated according to the degradation dynamics and the food safety standards of EU and Japanese. The results showed that the residual amount of difenoconazole gradually decreased with time in kiwifruit, the degradation dynamic curve was in accordance with the first order kinetic equationCt=0.5359e-0.184t, with a half-life of 3.767 d, and it was considered to be an easily degradable fungicide. According to the MRLs of EU and Japanese about kiwifruit, 10% difenoconazole WG was sprayed in a single dose at the recommended dosage, and it was safe to be picked and eaten after 10 d.

Keywords Kiwifruit; difenoconazole; residual dynamics; safety evaluation

猕猴桃营养丰富，尤其是富含维生素C，质地柔软，口感酸甜，是一种营养价值和经济价值很高的水果。中国猕猴桃产业发展迅速，种植面积已经跃居世界第一，产量居世界前列，国产猕猴桃以其独特的风味迅速走红，远销欧美、日本及中国香港地区。但随着贸易全球化的不断发展，食品安全卫生要求越来越严格，农药最大残留限量要求成为制约猕猴桃进出口贸易健康发展的突出问题。国内关于猕猴桃农药残留动态方面的研究不多，有对百菌清[1]、三氟氯氰菊酯[2]、氯吡脲[3]、多菌灵[4]、毒死蜱[5]、己唑醇[6]等相关报道，但未见苯醚甲环唑在猕猴桃中残留动态的相关报道。

苯醚甲环唑（Difenoconazole）为三唑类低毒杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂，本品为无色固体，熔点76 ℃，沸点220 ℃/4 Pa（0.03 mmHg），蒸气压120 nPa（20 ℃），易溶于有机溶剂，溶解性（g/L，20 ℃）：乙醇330、丙酮610、甲苯490、正己烷3.4、正辛醇95，水3.3 mg/L，对兔皮肤和眼睛有刺激性；对豚鼠无皮肤过敏；对野鸭低毒；对虹鳟鱼高毒；对蜜蜂无毒，无致突变性[7-8]。10％苯醚甲环唑水分散粒剂作为一种新型的高效内吸治疗性杀菌剂，杀菌谱广，对子囊菌、担子菌和半知菌等真菌有良好的杀菌作用，安全性较高，有保护和治疗双重效果，被广泛应用于植物真菌病害的防治中。

根据四川猕猴桃基地多年用药情况，苯醚甲环唑对猕猴桃炭疽病、灰霉病等多种真菌性病害都有良好的防治效果。为摸清其有效杀菌成分在猕猴桃中的消解动态，确保出口产品质量安全符合主要贸易国官方要求，本文开展了苯醚甲环唑在猕猴桃中的农药残留动态及安全性评价研究，其结果可为苯醚甲环唑在猕猴桃中残留限量标准的制定及其杀菌剂在实际生产中的安全使用提供参考。

1  材料与方法

1.1 试验材料

供试农药：10%苯醚甲环唑水分散粒剂，上海禾本药业股份有限公司。

标准物质：苯醚甲环唑（C19H17Cl2N3O3），BePure，纯度99.2%。

主要试剂：乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯；正己烷（C6H14）：色谱纯；丙酮（C3H6O）：色谱纯；无水硫酸钠（Na2SO4）：经650 ℃灼烧4 h，置于密闭容器中备用。

1.2 主要仪器设备

气相色谱-质谱联用仪（岛津GCMS-QP2010 Ultra）；分析天平（感量0.01 g和0.0001 g）；全自动浓缩工作站（BiotageTurbo Vap LV）。

1.3 采样及样品制备

1.3.1 采样

2019年8月，试验果园选在邛崃市猕猴桃出口备案基地的红阳猕猴桃果园，选取未施过药的猕猴桃健株，按照供试农药推荐的最高剂量单次施药，施药确保均匀，对照施清水，设三个重复。在施药后0 d、1 d、3 d、5 d、11 d、13 d、17 d、20 d和31 d，分别在植株的上、下、内、外、向阳和背阴面采摘猕猴桃果实，采样后立即检测或储存于-20 ℃冰箱中密封保存待测。

1.3.2 样品制备

取代表性样品500 g，去皮，切碎加工成浆状，混匀分成2份作为试样，密闭标记，-20 ℃冷冻保存。

1.4 残留测定

1.4.1 提取

准确称取10 g试样（精确至0.01 g），将称取的样品加入50 mL乙酸乙酯和15 g无水硫酸钠，振荡40 min，过滤，再加入20 mL乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，40 ℃下减压浓缩至干。用3 mL正己烷溶解，待净化。

1.4.2 净化

将活性炭小柱与中性氧化铝小柱串联，依次用5 mL丙酮、5 mL正己烷活化，将正己烷提取液过柱，再用3 mL正己烷清洗瓶子并过柱，保持液滴流速约为2 mL/min，去掉滤液，抽干后，用5 mL正己烷+丙酮混合溶剂（体积比3:2）进行洗脱，收集洗脱液于10 mL小试管中，40 ℃氮气吹干，用正己烷定容1.0 mL，0.45 μm有机相滤膜过滤，待测。

1.4.3 残留测定

参照GB 23200.49-2016[9]测定猕猴桃中苯醚甲环唑的残留量，试验方法的准确度、精密度、检测限、回收率等无需检测。气相色谱-质谱条件：色谱柱为石英毛细管柱30 m×0.25 mm，膜厚0.25 μm；色谱柱温度：初始温度200 ℃，以10 ℃/min升温至300 ℃（保持10 min）；进样口温度：300 ℃；色谱-质谱接口温度：280 ℃；载气：氦气，纯度≥99.999%，流速1.0 mL/min；进样量：1 μL；进样方式：不分流进样，1.5 min后开阀；电离方式：NCI；电离能量：216.5 eV；离子源温度：150 ℃；四极杆温度：150 ℃；反应气：甲烷，纯度≥99.99%，反应气流速：2 mL/min；检测方式：选择离子监测方式（SIM）；选择监测离子（m/z）：定量离子348，定性离子310、350、405；溶剂延迟时间：12 min。苯醚甲环唑的保留时间是15.74 min，其监测离子（m/z）丰度比为310:348:350:405=45:100:67:13，对其进行确证；根据定量离子（m/z）348对其进行外标法定量。

1.5 安全性评价

按照欧盟和日本标准规定的苯醚甲环唑在猕猴桃中的最大残留限量，评价10%苯醚甲环唑水分散粒剂的使用安全性。

2  结果分析

2.1 苯醚甲环唑残留动态

在喷施苯醚甲环唑当天测定苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留量，平均残留量为0.5359 mg/kg。从表1可以看出，随着时间的推移，苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留量逐渐下降，施药后13 d，苯醚甲环唑的平均残留量为0.0536 mg/kg，降解率达到90%。对苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留动态数据进行回归处理，动态曲线符合一级动力学方程Ct=C0e-kt，式中C0为初始浓度，t为间隔时间，k为降解速率常数。消解曲线如图1所示，残留动态方程为Ct=0.5359e-0.184t，R2=0.9507，消解半衰期T1/2=3.767 d，说明苯醚甲环唑在猕猴桃中消解速率快，残留期短，10%苯醚甲环唑水分散粒剂使用安全性较高。

表1 苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留动态

2.2 安全性评价

中国对柑橘、仁果类水果、李子、桃、油桃、樱桃、葡萄、西番莲、橄榄、荔枝、芒果、香蕉、番木瓜、西瓜等水果的苯醚甲环唑最大残留限量作出明确规定（如表2所示），各类水果的限量值（mg/kg）为0.05～2[10]，但对猕猴桃中苯醚甲环唑的最大残留限量未作出明确规定。

表2 水果中苯醚甲环唑最大残留限量

按照日本和欧盟有关猕猴桃农药残留限量的规定，苯醚甲环唑的最大残留限量值为0.10 mg/kg。施药后11 d，苯醚甲环唑平均残留量为0.0686 mg/kg，满足残留限量要求；施药后31 d，苯醚甲环唑的平均残留量为0.0030 mg/kg，远低于欧盟和日本所规定的最大残留限量值。

按照动态方程，施药后9.1238 d，苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留量为0.10 mg/kg；施药后10 d，苯醚甲环唑的残留量为0.085 mg/kg。因此，10%苯醚甲环唑水分散粒剂按照推荐剂量单次施药，10 d后猕猴桃中苯醚甲环唑的残留量能满足日本和欧盟官方要求，即采摘食用是安全的。

3  结论与讨论

本研究中苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留量随着时间的推移逐渐下降，动态曲线符合一级动力学方程Ct=0.5359e-0.184t，半衰期为3.767 d，说明10%苯醚甲环唑水分散粒剂施用后在猕猴桃中残留消解速率较快，安全性较高。按照欧盟和日本关于猕猴桃中农药最大残留限量的规定，10%苯醚甲环唑水分散粒剂按照推荐剂量单次施药，10 d后采摘食用是安全的；在施药后31 d，苯醚甲环唑在猕猴桃中的残留量远低于欧盟和日本所规定的最大残留限量值（0.10 mg/kg）。

农药残留联席会（Joint FAO/WHO Meeting on Pesticide Residues，JMPR）评估苯醚甲环唑的每日允许摄入量（Allowable daily intake，ADI）为0～0.01 mg/kg·bw，急性参考剂量（Acute reference dose，ARfD）为0.3 mg/kg·bw[11]。不考虑其他的食物来源，如按照苯醚甲环唑在猕猴桃中的含量0.10 mg/kg计算，则相当于60 kg成年人每天食用6 kg猕猴桃才会对人体健康产生风险，一餐或一天内食用180 kg才有可能导致急性中毒。尽管少量的低毒农药残留不会导致急性中毒，但长期食用可能对人体健康产生不良影响，尤其是食用农药残留超标的食品。综合上述研究，本文认为猕猴桃中苯醚甲环唑的最大残留限量值为0.10mg/kg是合理的。

基金项目：四川省科技计划项目“猕猴桃储藏期病害检疫及质量安全风险监控”（2018JY0288）

图1 苯醚甲环唑在猕猴桃上的消解动态

参考文献

[1]黄成名,程军勇,郑莉,等.百菌清在猕猴桃和土壤中残留动态[J].湖北林业科技,2015,44(5):27-29.

[2]雷林,周洪波,张军,等.三氟氯氰菊酯在猕猴桃上的残留动态研究[J].资源开发与市场,2009,25(7):592-593.

[3]李瑞娟,于建垒,宋国春,等.氯吡脲在猕猴桃和土中的消解动态与残留测定[J].山东农业科学,2009,(2):78-80,83.

[4]周洪波,崔永亮,丁建,等.多菌灵在猕猴桃上的残留动态研究[J].西南农业学报,2010,23(6):2148-2150.

[5]丁建,周洪波,崔永亮,等.毒死蜱在猕猴桃上的残留动态研究[J].西南农业学报,2011,24(1):373-375.

[6]王井田,刘达富,余良水,等.己唑醇在猕猴桃果实腐烂病防治中的应用及残留分析[J].浙江林业科技,2016,36(2):79-81.

[7]伍均锋.农药安全使用技术[M].河北:河北科学技术出版社,2016.

[8]张敏恒.新编农药商品手册[M].北京:化学工业出版社,2006.

[9] GB 23200.49-2016,食品安全国家标准 食品中苯醚甲环唑残留量的测定 气相色谱-质谱法(S).北京:中国农业出版社,2017.

[10] GB 2763-2016,食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量(S).北京:中国农业出版社,2017.

[11]宋稳成.JMPR评估农药ADI和ARfD清单[J].农药科学与管理,2009,30(8):12-17.