吴良萍1 苏 华1 麻晓莉1 李 娟1 罗兆飞1*

随着人民生活水平的提高，畜牧产品需求量逐渐增加，促使畜牧业不断发展，对饲料的需求也随之加大。虽然目前我国饲料生产总量处于世界领先水平^[1]，但是饲料原料相对缺乏。为确保饲料原料的供应，我国每年需要进口大量的饲料原料，主要进口市场集中于欧美发达国家，进口产品主要有饼粕、动物源性饲料原料、谷物类饲料原料等^[2]。

由于饲料本身的特性，在加工以及运输储存等过程中容易受到微生物污染，尤其是霉菌污染。饲料一旦发生霉变，其营养价值会降低，而且适口性会被破坏。此外，霉菌毒素会直接危害动物和人类健康，所以人们对霉菌及霉菌毒素污染所造成的损失高度重视^[3-4]。为提高饲料的安全性，确保其饲用品质，防止饲料霉变，应采用先进的微生物检测技术对饲料尤其是霉菌进行检测^[5]。因此，为防止不合格饲料原料进入国内市场，海关将霉菌指标作为进口饲料的监测项目之一^[6]。

目前，饲料霉菌总数检测采用的检测方法主要依据GB/T 13092-2006《饲料中霉菌总数的测定》^[7]，标准规定的培养时间为7 d，检测周期较长，与当前优化营商环境、加快进出口货物通关速度、提高口岸货物贸易便利化的要求不相适应。另外，GB 4789.15-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》中规定的培养时间仅为5 d ^[8]，表明缩短饲料霉菌总数检测的培养时间具有可行性。为此，本研究利用实验室日常检测的进口饲料原料样品，开展不同培养天数对霉菌总数的影响研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源

进口饲料原料样品60份，来自广西进口饲料原料报检样品。

1.1.2 仪器

生化培养箱（日本三洋MIR-254）；电子天平（德国赛多利斯BSA822）；高压蒸汽灭菌锅（日本Hirayama HV-85）

1.1.3 培养基和试剂

0.85%生理盐水（广东光华）；高盐察氏培养基（北京陆桥）。

1.2 方法

1.2.1 取样

采用GB/T 13092-2006中的方法进行测定。以无菌操作的方法在天平上称取固体样品25 g，加入225 mL无菌生理盐水，放置于振荡器上，振荡混匀30 min，得到1:10的均匀稀释液。

1.2.2 梯度稀释

用无菌吸管吸取1:10稀释液10 mL，注入带玻璃珠的无菌试管中，置振荡器上充分混合3 min，再取1 mL稀释液，注入含有9 mL无菌稀释液试管中；另取1支无菌吸管吹吸混匀5次，即为1:100稀释液；再取1 mL灭菌吸管，按前述操作步骤依次制备10倍梯度稀释液，注意每递增稀释1次，需更换1支1 mL无菌吸管。

1.2.3 霉菌测定

根据样品污染情况的估计，选取3个适宜稀释度，各吸取1 mL稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，同时做空白对照。然后，倾注凉至45℃左右的高盐察氏培养基于平皿中，充分混匀，待琼脂凝固后，置（28±1）℃恒温培养箱中，倒置培养，3 d后开始观察，分别在第4天、第7天记录检测结果。

1.2.4 菌落计数

选择霉菌数10～100个之间的平皿进行结果计数，同稀释度的2个平皿的霉菌平均数乘以稀释倍数，即得每克（或每毫升）检样中所含霉菌总数。若有2个稀释度均在计数范围内，则应参照GB/T 13092-2006中表1选择稀释度和霉菌总数报告方式。

2 结果

本研究主要检测了60份饲料原料样品，分别是10份谷物类饲料原料、10份饼粕类饲料原料、10份鱼粉饲料原料、30份动物饲料原料。对同一份样品，先培养4 d后计数霉菌总数，再放回培养箱继续培养7 d后，另外计数霉菌总数，选择菌落数在10～100个的平板进行计数，进行3次平行试验。培养4 d、7 d时饲料原料霉菌计数结果及T检验分析值，见表1。通过T检验分析，两者无显著性差异（P＞0.05）。

图1为谷物类饲料原料样品（1～10号），同一份样品于同一培养温度下培养4 d和7 d后，分别计数霉菌总数的结果，进行3次平行试验，通过T检验分析，两者无显著性差异（P＞0.05）。

图1 谷物类饲料原料样品（1～10号）培养4 d和7 d的霉菌总数比较分析

Fig.1 Comparative analysis of the molds count after 4 days and 7 days of culturein sample of cereal feeds materials (No.1-10)

图2为饼粕类饲料原料样品（1～10号），同一份样品于同一培养温度下培养4 d和7 d后，分别计数霉菌总数的结果，进行3次平行试验，通过T检验分析，两者无显著性差异（P＞0.05）。

图2 饼粕类饲料原料样品（1～10号）培养4 d和7 d的霉菌总数比较分析

Fig.2 Comparative analysis of the molds count after 4 days and 7 days of culture in sample of oil-seed-meals materials (No.1-10)

图3为鱼粉饲料原料样品（1～10号），同一份样品于同一培养温度下培养4 d和7 d后，分别计数霉菌总数的结果，进行3次平行试验，通过T检验分析，两者无显著性差异（P＞0.05）。

图3 鱼粉饲料原料样品（1～10号）培养4 d和7 d的霉菌总数比较分析

Fig.3 Comparative analysis of the molds count after 4 days and 7 days of culture in sample of fish meal feed materials (No.1-10)

图4为动物饲料原料样品（1～11号），图5为动物饲料原料样品（12～20号），图6为动物饲料原料样品（21～30号），同一份样品于同一培养温度下培养4 d和7 d后，分别计数霉菌总数的结果，进行3次平行试验，通过T检验分析，两者无显著性差异（P＞0.05）。

图4 动物饲料原料样品（1～11号）培养4 d和7 d的霉菌总数比较分析

Fig.4 Comparative analysis of the molds count after 4 days and 7 days of culture in sample of animal feed materials (No.1-11)

图5 动物饲料原料样品（12～20号）培养4 d和7 d的霉菌总数比较分析

Fig.5 Comparative analysis of the molds count after 4 days and 7 days of culture in sample of animal feed materials (No.12-20)

图6 动物饲料原料样品（21～30号）培养4 d和7 d的霉菌总数比较分析

Fig.6 Comparative analysis of the molds count after 4 days and 7 days of culture in sample of animal feed materials (No.21-30)

3 结论

本研究选取60份饲料原料样品，通过对同一培养温度下同一样品在不同培养天数内霉菌总数的变化进行分析比较，发现培养4 d和培养7 d后，霉菌总数计数结果均无显著差异（P＞0.05），总共进行3次平行试验。

在饲料原料霉菌检测中，由于饲料原料样品本身具有丰富营养，常含有生长特别快、菌丝很多的菌，霉菌通常在2～4 d就能够正常计数，一旦超过5 d，菌丝互相重叠，甚至覆盖整个平皿，导致无法准确计数，这也就要求霉菌计数通常在48 h内开始观察。在黄吉城等^[9]和周芷锦等^[10]的研究中也提到，如果只做霉菌计数，培养2～4 d已基本达到目的，除非是要进行霉菌鉴定，需要延长霉菌培养时间。另外，在食品的霉菌检测标准GB 4789.15-2016中，培养时间为5 d。由于食品的深加工工艺，常常导致霉菌受损，所以培养周期的延长有利于霉菌恢复生长。

但由于饲料原料霉菌检测标准GB/T 13092-2006要求霉菌计数必须观察到第7天，所以无形中延长了饲料原料的通关时长，不利于饲料原料的进口贸易通关便利化。本研究表明，在进口饲料原料霉菌总数的检测过程中，采用4 d的培养时间具有可行性。但本研究由于受样品限制的原因，选取的样品为饲料原料，并未选取饲料成品，所以不同培养时间对饲料成品霉菌计数的比较分析还需继续研究，如将第3天、第5天、第6天与第7天进行系统比较，得到更详细的实验结论，可为标准GB/T 13092-2006的修订提供更多依据。

第一作者：吴良萍（1992—），女，汉族，广西南宁人，本科，助理工程师，主要从事微生物检验，E-mail: 446391665@qq.com

通讯作者：罗兆飞（1978—），男，汉族，广西南宁人，硕士，高级兽医师，主要从事食品检验，E-mail: 975558@qq.com

1.南宁海关技术中心 南宁 530021

1. Nanning Customs Technology Center, Nanning 530021

表1 培养4 d、7 d时进口饲料原料霉菌计数结果及T检验分析值

Table 1 Mold count results and T-test analysis values of import feed materials after 4 and 7 days of culture

表1（续）

参考文献

[1] 黄燕. 电子商务对我国饲料进出口贸易发展的影响[J]. 中国饲料, 2020(20): 145-148.

[2] 赵金鑫, 田志宏, 陈红华. 中国饲料产品进出口贸易特征分析[J]. 世界农业, 2016(8): 117-123.

[3] 刘新义, 傅香希, 刘春喜, 等. 霉菌饲料中毒的危害与防治[J]. 湖南畜牧兽医, 2009(3): 28.

[4] 王丹. 霉菌对饲料安全的影响及检测[J]. 南方农机, 2020, 51(12): 43.

[5] 刘汉武, 金曙光. 霉菌对饲料安全性的影响与检测[J]. 畜牧与饲料科学, 2010, 31(3): 43, 48.

[6] 周健. 加强饲料监管 促进行业安全[J]. 福建畜牧兽医, 2020, 42(6): 50-52.

[7] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局, 中国国家标准化管理委员会. 饲料中霉菌总数的测定: GB/T 13092-2006[S]. 北京: 中国标准出版社, 2006.

[8] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数: GB 4789.45-2016[S]. 北京: 中国标准出版社, 2016.

[9] 黄吉城, 严纪文, 宋曼丹, 等. 霉菌检测过程中几个关键问题探讨[J]. 广东卫生防疫, 1999, 25(1): 90-92.

[10] 周芷锦, 赵真效, 穆琳, 等. 饲料霉菌污染与霉菌总数检测方法[J]. 中国饲料, 2014(8): 35-37, 41.

（文章类别：CPST-A）