化妆品菌落总数计数检测能力验证结果与分析-中国口岸科学技术-2022年01期

化妆品菌落总数计数检测能力验证结果与分析

作者：何冬华1 黄佳慧1 崔碧玲1

摘要本研究分析化妆品菌落总数的检测能力验证结果。依据《化妆品安全技术规范》（ 2015 年版）和 NIFDCPT-262（ 2020 年）化妆品菌落总数计数能力验证作业指导书，对编号为 118 和 026 的 2 份测试样品进行稀释、培养、计数。样品菌落总数结果分别为 4.0×104 CFU/g 和 2.7×105 CFU/g。经评价， 2 个考核样品 |Z| 小于 2，结果评价均为满意。本实验室具备化妆品菌落总数计数的检测能力。

何冬华1 黄佳慧1 崔碧玲1

关键词检测能力；化妆品；菌落总数计数； |Z| 值；能力验证

Studies on Proficiency Testing of Bacterial Colonies

Detection in Cosmetics

HE Dong-Hua1 HUANG Jia-Hui1 CUI Bi-Ling1

Abstract This paper analyzed the results of the proficiency test for the count of bacterial colonies in cosmetics. According to Safety and Technical Standards for Cosmetics 2015 and the Guidance on the Proficiency Testing of Bacterial Colonies Detection in Cosmetics [NIFDC-PT-262(2020)], two test samples were diluted, cultured and counted. The colony detection results of Sample 118 and Sample 026 were 4.0×104 CFU/g and 2.7×105 CFU/g. The |Z| values of the two assessment samples were both less than 2.0, and the evaluation results were thus satisfactory, which demonstrated that the laboratory had the ability to detect the count of bacterial colonies in cosmetics.

Keywords detection capability; cosmetics; the count of bacterial colonies; |Z|-value; proficiency testing

菌落总数是化妆品微生物污染的重要指标之一，直接反映化妆品的微生物污染程度，化妆品内含有多种营养物质，细菌易繁殖，从而被污染的风险较高，因此准确检测化妆品菌落总数项目是保证化妆品质量的有效保障。

能力验证是实验室技术能力的考核指标，其与现场评审考核共同构成能力评价体系，也是实验室内部质量控制的有效补充手段之一^[1-5]。2020年，本单位生物测定实验室参加由中国食品药品检定研究院组织开展的化妆品中菌落总数计数检测能力验证，结果均为满意。通过参加此次能力验证，监督了实验室对化妆品中菌落总数检测技术的持续稳定性^[6-7]，希望对该实验室以后参加能力验证和其他实验室参加能力验证有所帮助。

1 材料与方法

1.1 样品来源

编号为118和026的样品为西林瓶装的白色菌球及膏状粉底，样品为1 g/瓶，中国食品药品检定研究院提供。

1.2 试剂

卵磷脂吐温80营养琼脂（批号：1094831，广东环凯微生物科技有限公司）；0.85%无菌生理盐水（实验室自制）；卵磷脂吐温80营养琼脂（批号：200824，北京三药科技开发公司）；0.5%无菌TTC溶液（批号：6108147，广东环凯微生物科技有限公司）。

1.3 仪器设备

高压蒸气灭菌器MLS-3780，三洋电机国际贸易有限公司；生物安全柜BSC-13001 1A2，苏州安泰空气技术有限公司；电子天平BSA2202S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；生化培养箱LRH-250F，上海一恒科学仪器有限公司。

1.4 实验方法

参照《化妆品安全技术规范》（2015年版）和NIFDC-PT-262（2020年）化妆品菌落总数计数能力验证作业指导书进行稀释，培养计数实验。

1.4.1 样品前处理

按照NIFDC-PT-262（2020年）化妆品菌落总数计数能力验证作业指导书对2份样品进行前处理。获得样品后，待其恢复室温，再打开西林瓶，在生物安全柜中进行无菌操作，按照操作要求向每个西林瓶样品中加入稀释液，混匀后转移到灭菌试管中，然后再用稀释液润洗西林瓶2次，每次2 mL，制成1:10的稀释液。此溶液即为待测样品原液^[8]。

1.4.2 样品稀释

按照《化妆品安全技术规范》（2015年版）对样品进行相应的稀释：用无菌移液器吸取1:10待测样品原液1 mL置于盛有9 mL 0.85%生理盐水的稀释管中，涡旋振荡混匀，制成 1:100的样品稀释液，按此操作方法依次进行10倍梯度稀释，分别制成1:1000、1:10000、1:100000的稀释液，操作各环节应保证无菌和充分混匀^[9]。2份样品分别采用2个生产厂家的卵磷脂吐温80营养琼脂，在培养基中选择添加TTC和不加TTC，以及2名不同检测人员进行实验比对。

1.4.3 测定菌落总数

从1:10待测原液以及1.4.2 制成的不同稀释液分别吸取1 mL于无菌平皿中，每个梯度做2个平行样，同时分别吸取1 mL 0.85%生理盐水加入2个无菌平皿中，作为空白对照。为了区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100 mL冷却至45℃的卵磷脂吐温80营养琼脂中加1 mL 0.5%的TTC溶液^[9]，倾注平皿，待冷却凝固后，倒置放入(36±1)℃培养箱中培养2 d^[10-11]。

2 结果分析

2.1 观察与计数

2.1.1 不同培养基间比对

样品118和026在广东环凯微生物科技有限公司和北京三药科技开发公司生产的卵磷脂吐温80营养琼脂平板上的生长情况及菌落计数见表1。样品118和026均在1:1000、1:10000、1:100000稀释度的平板上形成肉眼可见的单一菌落形态，个别1:100000的平板上未长有任何菌，待测原液1:10及1:100 的稀释度下的菌落数较多，均大于300 CFU，部分平板菌落数更多，无法计数。其中，1:1000稀释液下的2个平皿的平均菌落总数在30～300 CFU^[12]。

2.1.2 检测人员间比对

2名检测人员对2份样品，同法按照1.4.2和1.4.3，在生物安全柜中用移液枪取各自稀释成不同系列浓度的供试液1 mL至2个无菌培养皿中，分别倾注冷却至45℃含0.5%TTC溶液的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，转动平皿使其摇匀，冷却凝固后倒置放于(36±1)℃培养箱中进行培养，结果见表2。

2.1.3 加TTC与不加TTC培养基间比对

样品118和026同1.4.2和1.4.3操作，在生物安全柜中用移液枪无菌吸取不同系列浓度的样品，各取1 mL至2个无菌培养皿中，同法制备2份，一份在每 100 mL冷却至45℃的卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1 mL 0.5%的TTC溶液，另一份不加0.5%的TTC溶液，分别倾注冷却至约45℃卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，转动平皿使其摇匀，冷却凝固后倒置放于（36±1）℃培养箱中进行培养，结果见表3。

2.2 实验结果

从表1、表2、表3中可以看出，培养基、检测人员的不同以及培养基中加与不加TTC的检测结果从菌落总数上看相差不大，挑选一组分散均匀的菌落，且加入TTC后菌落肉眼清晰可见，最终选择检测人员A使用的广东环凯微生物科技有限公司生产的卵磷脂吐温80营养琼脂，将1:1000稀释度下的检测结果作为能力验证报出结果，即样品118的检测结果：菌落总数4.0×10⁴ CFU/g；样品026的检测结果：菌落总数2.7×10⁵ CFU/g。

能力验证中的Z比分数是由其指定值和能力评定标准差计算的实验室偏倚的标准化度量^[13]，根据回收的实验室结果，将高浓度样品和低浓度样品的中位值作为指定值，其中118样品的指定值是4.7，026样品的指定值是5.43。取σ：0.25（来源：ISO 4833）作为能力验证评定标准差，用于计算 Z 值。计算公式为Z＝(x－X)/σ，其中，x为参加的结果，X为指定值，σ为能力评定标准差^[13]。本次能力验证考核的结论设为满意、可疑、不满意3类，2个浓度样品结果|Z| ≤2均为满意；任意浓度样品结果 2＜|Z|＜3为可疑；任意浓度样品结果|Z|≥3或2 份样品2＜|Z|＜3为不满意。本次能力验证全国24个省(市、自治区)共49家实验室报名参加，其中市场监管局系统36家，第三方检测实验室7家，其他检测机构6家，本次能力验证主要以市场监管局系统实验室为主^[13]。本实验室的2个样品118和026经中国食品药品检定研究院评价，检验结果均为满意，其Z值分别为0.01和-0.39（见图 1和图2，实验室代码为633）。说明本实验室具备检测化妆品菌落总数计数的能力，且化妆品菌落总数的计数能力持续稳定。

3 分析与总结

本次能力验证结果为满意。通过分析检测操作步骤对所用试剂和培养基进行的质量监控，总结出以下几点注意事项：(1) 在接收到样品后应仔细确认样品的完整性，有异常及时反馈，同时应立即进行检测，若不能立即检测，按说明书放置在-18℃冷冻；(2) 样品为西林瓶装的白色菌球及膏状粉底，由于粉底通常难溶解，日常检验时需加吐温80和液体石蜡进行乳化，此次能力验证按照作业指导书操作，无须添加吐温80和液体石蜡，可能由于粉底量较少，通过多次涡旋振荡混匀可以分散；(3) 菌落计数时，通过人员比对和不同厂家生产的培养基比对可知，菌落总数计数人员和成品培养基的差异对检测结果的影响较小，主要是操作中在进行样品溶解时应确保充分混匀之后再进行系列稀释，同时注意稀释倍数；(4) 平板培养24 h后应计数一次，防止菌落蔓延，培养48 h再次计数，最终以48 h计数结果报出；(5) 实验人员应注重详细填写原始记录，以便后期进行原因分析。

参考文献

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