毕秀欣 韩鹏宇 于波 隋凤鸽 李明 吴佳月

摘 要 本研究使用酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、胶体金方法（Colloidal Gold Method，CGM）与丙氨酸氨基转氨酶（Alanine Aminotransferase，ALT）联合检测，探讨其在出入境人员丙型病毒性肝炎监测中的作用。以辽宁口岸地区出入境人员疑似丙肝的178例血液样品为研究对象，用ELISA和CGM进行丙肝抗体检测，同时检测血液样品中的ALT，统计分析检测数据。结果显示：ELISA阳性172例，灵敏度为97.26%，特异性为59.00%；CGM方法阳性139例，灵敏度为91.78%，特异性为35.24%；ELISA特异性优于CGM方法（p＜0.05），丙肝病例中ALT结果异常率为61.64%，高于对照组（10.48%），有统计学意义（p＜0.05）；随着ELISA吸光度值升高，丙肝病例、CGM方法阳性率与ALT结果异常率呈上升趋势。结果表明，ELISA、CGM方法联合ALT检测有利于丙肝病例的及时发现，降低漏检情况发生，为更有效地做好出入境人员传染病工作提供科学依据。

关键词 丙肝；丙肝抗体；丙氨酸氨基转氨酶；出入境

Application of ELISA, CGM and ALT in Hepatitis C Survellance of Entry and Exit Personnel

BI Xiu-Xin ¹ HAN Peng-Yu ² YU Bo ³ SUI Feng-Ge ^1* LI Ming ⁴ WU Jia-Yue ¹

Abstract In this paper, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)、Colloidal Gold Method (CGM) were used in combination with Alanine Aminotransferase (ALT), to explore the prevalence of hepatitis C in entry and exit personnel. At Liaoning Port Area, 178 blood samples of suspected hepatitis C among entry-exit personnel were studied. Hepatitis C antibody detection in blood samples was performed by using ELISA, CGM method and ALT, and the detection data was statistically analyzed. According to the results, 172 cases were ELISA positive, with a sensitivity of 97.26% and a specificity of 59.00%; 139 cases were CGM method positive, with a sensitivity of 91.78% and a specificity of 35.24%. The specificity of ELISA was better than CGM method (p＜0.05). The abnormal result rate of ALT in Hepatitis C cases was 61.64%, higher than the control group (10.48%), with statistical significance achieved (p＜0.05); As the ELISA absorbance value increased, the positive rates of Hepatitis C cases, CGM method positive cases, and ALT abnormal results showed an upward trend. The results showed that the combination of ELISA、CGM methods and ALT detection is beneficial for timely detection of Hepatitis C cases and reduces the occurrence of missed detections, thus providing scientific basis for more effective work on infectious diseases of entry and exit personnel.

Keyword Hepatitis C; antibody of Hepatitis C; Alanine Aminotransferase; entry and exit personnel

基金项目：海关总署科研项目（2024HK092）；大连海关科研项目（2023DK13）

第一作者：毕秀欣（1969—），女，满族，辽宁宽甸人，本科，副主任技师，主要从事卫生检疫实验所检测工作，E-mail: 631054232@qq.com

通信作者：隋凤鸽（1987—），女，汉族，辽宁东港人，本科，医师，主要从事卫生检疫实验所检测工作，E-mail: 244576482@qq.com

1. 丹东国际旅行卫生保健中心（丹东海关口岸门诊部） 丹东 118000

2. 丹东海关 丹东 118000

3. 哈尔滨海关技术中心 哈尔滨 150001

4. 大连海关 大连 116001

1. Dandong International Travel Health Care Center (Dandong Customs Port Clinic), Dandong 118000

2. Dandong Customs, Dandong 118000

3. Harbin Customs Technical Center, Harbin 150001

4. Dalian Customs, Dalian 116001

丙型病毒性肝炎（以下简称“丙肝”）是由丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）感染引起的传染性疾病，可通过血液、母婴、性接触等方式进行传播，主要侵犯肝脏，导致急性、慢性肝炎，丙肝发病较为隐蔽，感染后无明显症状，发现、诊断较为困难，若不能及时发现将转为慢性丙肝 ^[1]。《健康中国行动（2019—2030年）》提出，进一步加强我国丙型肝炎防治工作，不断降低病毒性肝炎流行水平，保障人民群众身体健康，助力全球在2030年实现消除丙型病毒性肝炎公共卫生危害的目标。在海关卫生检疫工作中，实验室检测是发现丙肝的重要手段。目前常见的实验室丙肝检测方法包括生化学检测、血液抗-HCV（丙肝抗体）、血液HCV-RNA（丙型病毒性肝炎核糖核酸）^[2]。

本研究针对疑似丙肝的血液样品178例，采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）和胶体金（Colloidal Gold Method，CGM）两种方法检测血液样品中的丙肝抗体，同时用生化分析仪检测样品中的丙氨酸氨基转氨酶（Alanine Aminotransferase，ALT），探讨ELISA与CGM方法联合ALT在丙肝监测中的适用性，为防止丙肝跨境传播提供科学依据，为健康中国贡献海关力量。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

1.1.1 样品信息与样品处理

以辽宁地区2018年1月至2022年12月出入境人员中疑似丙肝的178例血液样品为研究对象，以地方传染病医院诊断丙肝为标准。样品于-70℃冰柜长期保存。

1.1.2 实验试剂

ELISA试剂（北京万泰生物药业有限公司）；CGM试剂（艾博生物有限公司和北京万泰生物药业有限公司）；ALT试剂（上海科华生物工程股份有限公司）。

1.2 仪器与设备

全自动酶免分析仪（ADC ELISA 800）（烟台艾德康生物科技有限公司）；生物安全柜（NU-543-400S）（上海天美科学仪器有限公司）；移液器（10-100UL）（艾本德（上海）国际贸易有限公司）；全自动生化分析仪（日立 7180）（日立（中国）公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 丙肝抗体

采用ELISA和CGM方法检测，其中ELISA方法采用双抗原夹心法。严格按照试剂说明书操作和判读结果。ELISA：S/CO＞1.0判读结果阳性；S/CO＜1.0判读结果阴性；CGM方法：质控区内（C）与检测区内（T）均有紫红色条带判读为阳性，C区有紫红色条带与T区无紫红色条带判读为阴性，C区无紫红色条带判读试验无效。

1.3.2 ALT测定方法

采用速率法，测定范围5～1000 U/L。生物参考区间：女性5～40 U/L；男性7～50 U/L。女性＞40 U/L，男性＞50 U/L，为结果异常。

1.4 观察指标

将178例疑似丙肝病例的血液样品分成2组，以地方传染病医院确诊为丙肝的73例作为考核组，排除丙肝的105例作为对照组。观察考核组与对照组的ALT结果异常情况；观察ELISA、CGM方法的灵敏度、特异性；观察ELISA方法吸光度值与丙肝病例、CGM方法结果及ALT结果的关系。

1.5 丙肝诊断

ELISA、CGM方法阳性、ALT升高者均经总检医生初步诊断后转诊或建议到地方传染病医院进一步诊治，依据WS 213—2008《丙型病毒性肝炎诊断标准》^[2]，经传染病医院医生作进一步检查和诊断，最终确诊是否为丙肝。

1.6 数据统计

用SPSS 21版本软件进行数据统计分析，数据比较采用χ²检验，p＜0.05，表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA、CGM与ALT检出情况

178例疑似丙肝的血液样品中，ELISA结果阳性172例，灵敏度97.26%，特异性为59.00%；CGM方法阳性139例，灵敏度为91.78%，特异性为35.24%，ELISA特异性优于CGM（p＜0.05）；ALT异常结果56例，其中，考核组结果异常61.64%（45/73），对照组结果异常率10.48%，两组比较有统计学意义（p＜0.05），见表1。

2.2 S/CO值大小与检出情况

随着ELISA的吸光度值增大，CGM方法与丙肝病例符合性上升，ALT结果异常也随着升高。当S/CO值在≤3.00时，丙肝病例为0，随着吸光度值的升高，丙肝病例呈现上升趋势，当S/CO≥7.00时，CGM方法与ELISA符合率为98.46%，丙肝检出率达到97.26%（63/73），见表2。

3 讨论

《2024年全球肝炎报告》显示，全球每年由病毒性肝炎（乙型和丙型肝炎）造成的死亡人数从2019年的每年110万上升至2022年的每年130万。世界卫生组织（WHO）从187个国家收集的最新数据表明，全球新增近220万病毒性肝炎，其中丙肝患者新增近100万^[3]。丙肝起病较为隐匿，极易被感染者忽略。早发现、早诊断对于减少疾病慢性化及丙肝防控具有重要意义。

HCV-RNA阳性是确认丙肝感染的关键标准。虽然血清HCV-RNA阳性可以诊断HCV感染，但该项检测方法实验技术要求高、设备昂贵、影响因素多，仍不适用于大面积推广^[4]。值得注意的是，在血清中检测不到HCV-RNA，也并不意味着肝脏没有HCV复制^[5]。丙肝抗体是人体免疫系统在感染HCV时产生的抗体，因此，丙肝抗体是判断HCV感染的一个重要标志，是发现丙肝的重要手段。

在丙型病毒性肝炎抗体检验中，双抗原夹心法的准确度、特异性及灵敏度明显优于间接法^[6]。本研究采用双抗原夹心法，灵敏度为98.46%，高于刘丽珍等^[7]所得出的灵敏度为84.62%的结果，特异性为59.00%，漏检1例。本研究中ELISA特异性不高，可能与本次选择研究对象为健康人群，同时与丙肝抗体本身特点也有关，抗体产生有窗口期，可能产生漏检情况。另外，HCV感染后即使已经被自身免疫系统清除，或是经过治疗后被消除，丙肝抗体可能仍存在等原因也会影响结果准确性和特异性。本次研究发现，随着吸光度值增大，CGM方法与ELISA的符合率、丙肝病例检出率、ALT异常结果均出现上升趋势。当S/CO≥7.00时，CGM方法与ELISA结果符合率为98.46%，丙肝病例检出率达到97.26%（71/73）。

CGM方法作为筛查方法之一，具有低成本、操作简单、短时间内可读取结果的特点^[1]。由于胶体金的制备简单稳定，无须着色，且能与多种蛋白质结合，该技术应用广泛^[8]。本次研究中，CGM方法灵敏度为91.78%，特异性为35.24%，特异性低于ELISA，漏检6例，漏检率高于ELISA，分析原因可能源于多个因素，包括抗体窗口期可能会出现漏检情况，以及与试剂生产商的质量控制、检测环境的标准化程度以及操作人员的手工技术熟练度等有关。黄晓兵等^[9]在研究胶体金试剂厂商时发现，该检测方法的Cut-off值未制定统一标准，加上市面上不同厂家试纸条的敏感度、特异性和符合率均存在差异，当 Cut-off 值过低时容易出现假阳性，当Cut-off 值过高时容易出现假阴性。因此，使用CGM方法应加强试剂的选择和技术性验收，确保检测结果的准确性，降低漏检情况发生。

丙肝抗体是丙型肝炎诊断中的主要指标之一，但由于患者发生丙型肝炎病毒感染后，丙型肝炎抗体出现时间较晚，多在患者发病2～6个月，甚至多达１年才转为阳性，因此，将丙肝抗体作为早期丙型肝炎诊断方法仍有所不足^[10]。ALT应用于肝脏疾病的实验诊断中，作为一种高度敏感的生物标志物，血液中ALT水平的变化能迅速反映出肝脏的损伤状态。在急性肝损伤事件中，血清中的ALT浓度往往能在临床症状（如黄疸）显现前就出现显著上升，且其升高程度通常与患者的病情严重程度及恢复进程相吻合。不仅如此，ALT的升高同样可见于一系列慢性肝脏疾病，如慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝癌以及肝淤血等。ALT结果在丙肝筛查中有一定的作用^[11]。在本次研究中发现1例ALT异常结果转诊中发现丙肝病例。分析原因，可能处于HCV感染窗口期或是抗体试验结果出现假阴性等原因引起。在ALT检测中发现观察组ALT结果异常率为61.64%，对照组结果异常率10.48%，该发现与高芳芳等^[12-13]的研究结论相一致，也再次证实了ALT在疾病筛查和诊断中的关键作用，是发现丙肝的重要线索。ALT对于排除HCV窗口期具有一定补充作用，可以预防性提示隐匿性丙肝及其他已知或未知肝炎病毒的感染^[14]。虽然ALT结果升高本身并不足以确诊HCV感染，但它是一个重要的警示信号，提示医生应该考虑进行更深入的丙肝相关检测。

综上所述，丙肝的早期发现对于预防疾病进展和减轻肝脏损伤至关重要。丙肝抗体的ELISA与CGM方法是及时发现丙肝的主要手段。ELISA适用批量标准化检测，CGM方法适用急诊、口岸快速检测。但因ELISA与CGM方法检测丙肝均有局限性，而且这两种方法都存在抗体产生窗口期时检测不出导致漏检情况。在基层实验室暂时受HCV-RNA检验条件限制，不能开展核酸检测的情况下，应优化实验室检测手段，利用对ALT水平的监测为疾病筛查提供有价值的警示信息，同时应加强ELISA与CGM方法试剂标准化采购和验收，不断提高技术人员的检测能力，为完善丙肝防控体系，加强感染控制措施，切断丙肝病毒的传播途径，发挥海关国际旅行卫生保健中心实验室的技术支撑作用，为出入境人员传染病监测提供科学依据。

参考文献

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表1 ELISA、CGM方法与ALT检出情况

Table 1 Detection condition of ELISA, CGM methods and ALT

注: “+”代表结果阳性; “-”代表结果阴性.

表2 不同的S/CO值与CGM方法结果、丙肝病例和ALT检出情况

Table 2 Relationship between absorbance value and CGM result, Hepatitis C and ALT

注: “ELISA”代表ELISA方法检查的阳性结果; “CGM”代表CGM方法检测的阳性结果.